راهنمای جامع پروتکل‌های آزمایشگاه ژنتیک مولکولی

معرفی مخزن

این مخزن شامل پروتکل‌های استاندارد آزمایشگاه بیولوژی و مهندسی ژنتیک دبیرستان علامه حلی ملارد برای شرکت در المپیاد زیست‌شناسی و بخش پژوهشی جشنواره جوان خوارزمی است.

پروتکل‌های عملیاتی:

استخراج DNA ژنومی:
لیز غشای سلولی با بافر حاوی SDS و پروتئیناز K
رسوب‌دهی پروتئین‌ها با ایزوپروپانول و شستشو با اتانول ۷۰ درصد
واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR):
تنظیم فازهای Denaturation در ۹۵ درجه، Annealing در ۵۸ درجه و Extension در ۷۲ درجه
الکتروفورز افقی ژل آگارز:
ژل آگارز ۱ درصد با بافر TAE و ردیابی باندهای DNA زیر نور UV یا Blue Light

جدول اجزای مخلوط واکنش PCR

جزء واکنش	غلظت اولیه	حجم برای واکنش ۲۵ میکرولیتری	غلظت نهایی
بافر PCR	10X	2.5 µL	1X
مخلوط dNTP	10 mM	0.5 µL	0.2 mM
پرایمر فوروارد	10 µM	1.0 µL	0.4 µM
پرایمر ریورس	10 µM	1.0 µL	0.4 µM
آنزیم Taq DNA Polymerase	5 U/µL	0.25 µL	1.25 U
DNA الگو (Template)	50 ng/µL	1.0 µL	~50 ng
آب مقطر استریل	-	تا حجم نهایی ۲۵ µL	-

نسخه کامل پروتکل آزمایشگاهی به صورت فایل PDF در بخش دانلودها قرار دارد.

دیدگاه‌ها، پرسش‌ها و نظرات دانش‌آموزان (1)

طاها صفاری ۲۲:۰۱ · 2 ساعت پیش

نکات ایمنی هود لامینار و بافرهای الکتروفورز بسیار دقیق و کاربردی هستند.